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激光共聚焦顯微鏡技術的應用

2020-10-21
激光掃描共聚焦顯微鏡(laser scanning confocal microscope LSCM )是20世紀80年代發展起來的一項具有劃時代意義的高科技新產品,是當今世界進的細胞生物學分析儀器。它是在熒光顯微鏡成象的基礎上加裝激光掃描裝置,使用紫外光或可見光激發熒光探針,利用計算機進行圖象處理,對生物樣品進行定性、定量、定時和定位研究。已廣泛應用于細胞生物學、生理學、病理學、解剖學、胚胎學、免疫學和神經生物學等領域。
利用放置在光源后的照明針孔和放置在檢測器前的探測針孔實現點照明和點探測,來自光源的光通過照明針孔發射出的光聚焦在樣品焦平面的某個點上,該點所發射的熒光成像在探測針孔上,該點以外的任何發射光均被探測針孔阻擋。照明針孔與探測針孔對被照射點或被探測點來說是共軛的,因此被探測點即共焦點,被探測點所在的平面即共焦平面。計算機以像點的方式將被探測點顯示在計算機屏幕上,為了產生一幅完整的圖像,由光路中的掃描系統在樣品焦平面上掃描,從而產生一幅完整的共焦圖像。只要載物臺沿著Z軸上下移動,將樣品新的一個層面移動到共焦平面上,樣品的新層面又成像在顯示器上,隨著Z軸的不斷移動,就可得到樣品不同層面連續的光切圖像。
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